Marc Márquez (Ducati Lenovo Team) a repris le guidon pour la première séance d'essais libres (FP1) et a terminé à la 15e place, signant un meilleur tour en 1:47.419. Le pilote de 33 ans, de retour à la compétition, affichait ainsi un retard de 1,177 seconde sur le temps de référence établi par le leader de la séance et vainqueur du Grand Prix de Catalogne, Fabio Di Giannantonio (Pertamina Enduro VR46 Racing Team).
À l'issue de la FP1, le n°93 s'est rendu au centre médical pour un examen prévu afin d'évaluer son état après son retour de blessure. À l'issue de celui-ci, le pilote Ducati a été déclaré apte à disputer le reste du week-end au Mugello, avec pour objectif d'offrir un beau spectacle lors de l'épreuve à domicile de son équipe devant les fans de Ducati.